我国是食用药用菌生产大国，长期以来，应用菌种主要是固体菌种，从二十世纪八十年代开始液体菌种在部分院校实验室小规模试验，九十年代后业内有液体菌种培养器出现（发酵罐），采用高压高温对其培养液进行灭菌，冷却后接种进行深层发酵，形成菌丝（球）体，应用于食药菌栽培，效果优于固体菌种。本人历经数年研究，采用适量添加专用杀菌剂对培养液进行处理，不采用高温高压灭菌的方式，生产液体菌种进行食用菌栽培取得成功，在此基础上又对北虫草进行栽培试验，其产量质量达到常规发酵罐通过高温高压灭菌的效果。培养液无需灭菌制作液体菌种的成功，填补了国内外食用菌液体菌种生产领域的技术空白。在全国第四届食用菌工厂化会议上，将这项新技术献给与会代表共享。
    一.北虫草无需高温灭菌液体菌种制作
    北虫草无需灭菌液体菌种发酵过程包括试管斜面培养、三角瓶通气培养，15L发酵罐容器培养。其发酵工艺如下：
    试管母种驯化→接入无需灭菌培养液→静培三天→萌发通气→扩大培养
    1.菌种来源：上海农科院菌种厂
    2.液体菌种培养液配方:白糖1.5%、葡萄糖1.5%、土豆淀粉0.2%、琼脂0.01%、蛋白胨0.05%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、B10.01%、食用油0.03%（或聚氧丙烯甘油0.03%）。
    3.发酵液的制备：自来水培养液+专用杀菌剂。
    4.发酵容器：采用2500ml抽滤瓶（可接2500瓶栽培料），上盖配套橡皮塞。菌种扩繁采用18.9L饮水桶（可接栽培料15000瓶），撬去原封口，配套以橡皮塞。抽滤瓶橡皮塞打两个孔眼，安装上8mm的铝管，装管时抽滤瓶一根短管与瓶塞下内口平行，以利排气。另一根长管离瓶底5mm。抽滤瓶本身有一个通透排气嘴可以用来排放液体菌种。扩繁菌种的饮水桶橡皮塞上打三个孔眼，一根短两根长，便于进气、排气、接种用。然后再准备硅胶管数米和三通管数个用于连接管道。
    5.接种与培养：按照配方比例称量好应用原料，添加到定量的自来水中，盖好一级种瓶塞，静止二十四小时接入北虫草试管斜面菌种，种块大小0.5×0.5cm，每瓶接一支试管（无菌条件下接种），在22-24℃温度下静置培养三天。待液面有新生菌丝和分生孢子长出时，进行送气培养，在22-24℃培养三天，瓶内菌体达到80%-90%时转入扩繁容器培养48-60h，即可用于生产。
    二、无需灭菌北虫草液体菌种的制作过程技术要点为：
    1.提高北虫草液体种菌体含量的措施有三个方面：
    ①合理调制培养液，适当增加培养液浓度。
    ②培养基固形物加少量热水溶化后同自来水一起置于发酵容器，由于不经过高温灭菌，不使蛋白质变性，减少非溶性物质形成，阻止了褐色素的增加，有利于北虫草菌体酶分泌，增强了北虫草菌丝体分生孢子的繁殖。
    ③适当延长发酵时间，充分利用蛋白质、氨基酸、糖类、碳水化合物等营养，使菌丝体生长量达到最高。
    2.提高北虫草液体菌种的纯度的措施有三个方面：
    ①母种必须通过驯化、提纯、选用分生能力强、生命力旺盛的菌种。
    ②液体菌种培养期间要定期用臭氧进行环境消毒，保持环境清洁。空气过滤系统采用消毒液二级循环进入发酵容器，一切管道均经过无菌空气正压吹风半小时以上使用。
    ③培养液进入发酵容器时添加适量的专用杀菌剂。
    这三项措施使北虫草无需灭菌液体菌种在发酵过程中使菌种纯度高达100%。
    三.北虫草栽培技术
    1.栽培设置：栽培室应设置有控温、加湿、通风系统，室内设置有层架、瓶栽架宽25cm高以瓶而定，盒栽宽高以盒来定，各走道为1m、走道间隔1m距离配置日光灯。
    2.培养基的调制：以大米、小麦、蚕蛹粉为主料，营养液按照下述配方配置：蔗糖1.5%、葡萄糖1.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%。调制时将小麦（或大米）装入栽培容器。罐头瓶每瓶30-50g，塑料盒每盒300-500g，然后加入营养液。料水比1:1.5。瓶口用丙烯膜封口，盒口用带通气的盖密封。
    3.灭菌、接种：将装好的小麦（或大米）的瓶、盒封口后进行高压高温灭菌，灭菌温度为126℃，灭菌时间为4h，出锅后冷却接入北虫草菌种。接种前用1:5倍处理过的自来水稀释，用专门的接种工具，每瓶接入5-10ml、每盒接入100ml，均匀地喷到料面。
    4.培养出草：接种后的菌瓶或菌盒整齐放置于培养架上，室内清洁干净，用臭氧消毒（10-20mg/m3）40min。前期室内保持15℃的温度，空气相对湿度以60-70%为好。菌瓶、盒内有白色菌丝或分生孢子时，提高室温到20-22℃，这样可以减少污染有利于发菌。接种后10-15天菌丝基本上长透培养料，这时打开灯光，在瓶栽封口膜上刺3-4个孔，盒栽的要取掉透气塞。灯光照射时间每天不少于10h，室温18-20℃，地面喷水诱导转色和出草，室内定时通风换气。3-5天后培养料面由白转为桔黄色，原基即可发生，空间湿度保持90%左右，每天延长通风时间。待北虫草子实体长至7-8cm，甚至长度达到10-12cm，头部有明显纹路时即可采收，转化率可达80-90%，干品达13%左右。
    5.采收与烘干：将成熟的北虫草子实体采收后，去掉根部杂质，挑选无异物的子实体滩于竹制或不生锈的金属筛片上在室内风吹2h，再进行干燥，干燥温度不可过高，温度由低到高，由35℃到60℃逐渐增高，干燥过程注意排湿。这样干品色泽好质量优，有条件的种植企业可采用微波干燥效果更佳（严禁日光暴晒）。