1、锅内的冷空气必须排尽。冷空气的热膨胀系数大,若锅内留有冷空气,当灭菌锅密闭加热时,冷空气受热会很快膨胀,压力上升,造成压力表虽然已指到0.103兆帕,但锅内温度却只有100℃(灭菌不彻底。特别是使用只装有压力表没有温度计的灭菌锅时,尤应注意。
　　2、灭菌锅内装的物品必须排列疏松,以利蒸汽畅通。灭菌锅内蒸汽畅通与否,关系到灭菌温度是否均衡。灭菌物品若放得 过多、过密,会妨碍蒸汽的穿透,造成局部温度偏低,达不到彻底灭菌。
　　3、灭菌结束应缓慢减压(排气)。灭菌结束后,排气降压不能太快,应使锅内压力徐徐下降到0.034兆帕以下时,方可打开放气阀,否则排气减压太快,使试管、菌种瓶、塑料袋内压力大于锅内压力,引起棉塞冲出管口、瓶口,塑料袋胀破;若为液体培养基灭菌,如减压太快培养液会突然沸腾从容器内喷出或沾湿棉塞。
　　4、注意防止棉塞潮湿。灭菌时,因锅内蒸汽在锅的内壁会形成凝结水,沿锅壁下流,浸湿棉塞。潮湿的棉塞在培养过程中,容易感染杂菌。为防止棉塞潮湿,装锅时,棉塞不能接触锅壁,在试管和菌种瓶上面应盖防水油纸,灭菌结束时,先排放锅内热水,再慢慢排放蒸汽降压。若棉塞潮湿,可利用锅内余热烘烤一段时间,干了再出锅。
　　5、灭菌锅需经常检修、保养,保持管道畅通。安全阀失灵是导致高压灭菌锅出事故的一个主要原因,因此,应特别注意定期检查。使用高压蒸汽灭菌锅,应有专人负责,以确保安全生产。（来源：中国农业推广网）