1、金针菇菌种购置及生产用主要设施设备

1．1主要设施。接种室、培养室、操作室、贮藏室，其面积大小以生产规模而定。

1．2主要设备。超净工作台(或接种箱)、恒温箱、操作台、转椅、高压灭菌锅、常压灭菌锅、钢精锅、天平、台秤、量筒、玻璃瓶、试管等。

1．3菌种选购。选购优质高产、抗逆性强、性状稳定、生长快、纯度高、无杂菌、无病虫害的优良品系。

2、各菌种培养基选择制作

2．1母种斜面培养基的制作：

配方①马铃薯200--250克，琼脂20克、白糖20克、水1000毫升、pH值调至6．5。②马铃薯200--250克、琼脂20克、葡萄糖20克、水1000毫升、pH值调至6．5。③马铃薯200--250克、硫酸镁5克、白糖20克、维生素B1(B2)100毫升、磷酸二氢钾2．50克、琼脂20克、水1000毫升、pH值调至6．5。

制作：把马铃薯切成片放钢精锅中煮沸30分钟，用四层纱布过滤取汁，加入琼脂及其他料，搅拌溶解后加入糖，再加水至1000毫升，移入培养试管，容量为管长1／5。

2．2原种、栽培种培养基的制作：

配方

①木屑培养基：阔叶树木屑73％，蔗糖1％、细米糠(或麦皮)2．50％、碳酸钙1％、水料比1：1．20--1．30。

②棉子壳培养基：棉子壳88％、蔗糖1％、细末糖(或麦皮)10％，碳酸钙10％、水料比同。

③麦粒培养基：麦粒(或玉米粒也可以)99％碳酸钙1％，水料比1：1．20。

制作：按上述比例要求称取各样配料后混合。糖和化学物品用水溶化后加入料中拌匀，并将溶化用水量记入水料比中。棉籽壳在混合前拌水预湿；麦粒混合前浸泡再入锅煮熟，以麦粒不破肚为宜，捞出晾干后于其他料混合。全部料混合配好后装瓶，装量为瓶容量的1／3。

3、液体菌种制作

配方①葡萄糖3％、玉米粉1％、豆饼粉2％、碳酸钙0．20％、磷酸二氢钾0．10％、酵母粉0．50％、硫酸镁0．05％，将各成分溶于水中混匀，配制成悬浮液，煮沸30分钟后取上清液定溶，装入盛有10粒小玻璃珠的500毫升三角瓶中。

配方②马铃薯20％、蛋白质0．20％、葡萄糖20％、磷酸二氢钾0．05％、硫酸镁0．05％、氯化钾0．01％、马铃薯按常规方法提取滤液，添加其他成分后定溶装入瓶。

配方③玉米粉5％、酵母粉0．50％、蔗糖4％、碳酸钙0．20％、VB1毫克、制作方法与配方①相同。

3．1培养基灭菌与设施设备消毒

3．2母种斜面培养基。液体培养基高压灭菌用每千方厘米1．10千克，在121℃温度下灭菌30分钟，固体菌种培养基在灭菌后立即排放斜面，斜面长度占试管长度1／2为宜。

3．3原种、栽培种培养基。高压灭菌用

每千方厘米1．50千克压力，在121℃温度下灭菌1小时。麦粒为原料的培养基适当延长灭菌时间。也可用常压蒸汽灭菌，即在100℃温度下持续灭菌8小时。

3．4设施消毒。接种室、培养室、操作室用福尔马林加热熏蒸，也可用硫磺粉燃烧熏蒸，用量福尔马林每立方米空间10毫升，硫磺粉每立方米空间15克；用次氯酸钙(每千方米20--40克)水溶液，2％--3％来苏儿喷洒地面和墙壁。

3．5设备消毒。超净工作台及其各种工具用70％酒精或5％石碳酸0．25％新洁尔灭浸泡擦洗。接种前，打开紫外线灯灭菌15分钟。

4、菌种的接种与培养

4．1母种的接种与培养。接种时试管(瓶口)朝下并靠近酒精灯火焰处，用接种针把母种试管内的菌丝体连同原培养基切成0．50厘米x0．50厘米小块移入1支新试管培养基斜面上，塞紧棉花，放到23℃恒温箱或培养室中培养8--10天菌丝即长满斜面。

4．2原种、栽培种的接种与培养。用接种针把母种试管内的菌丝体挑取1平方厘米菌种块接入原种(或栽培种)瓶中的培养基上，同样瓶口靠近酒精灯火焰处，速度要快。接好后塞上棉花，放到23℃培养室中培养。

4．3液体菌种的接种与培养在高压灭菌后的液体培养基内接入2平方厘米生长旺盛的斜面母种一块，使汽生菌丝的一面向上悬浮于液面，在23℃温度下静态培养2--3天，再置于复式摇瓶机(振荡频率80--100次／分钟)上振荡培养3--4天，当液体呈浅黄色、清澈透明、具有香味时，移入消毒后的接种室，在酒精灯火焰口处将液体倒入经消毒的栽培种培养基表面，量为每瓶10--15毫升，然后置于23℃气温的培养室中培养27天左右即可成为栽培种使用。液体菌种的特点是在原种量小的情况下作为原种使用，采用液体培养基培养仅需1周左右，比培养固体原种可缩短4倍的时间，而且菌龄一致，菌丝健状，生活力旺盛。

5、金针菇菌种的保藏

5．1低温保藏。把长满斜面的菌种放在4℃冰箱中，每隔5个月再移植1次。

5．2常温保存。用木屑配制的培养基菌丝长满后用石腊封闭棉塞，常温下保存。

5．3液氮保藏。菌种贮藏在-130---193℃的液氮罐内。