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PDA培养基的制作方法

发布日期: 2013-01-07   来源:中国食用菌商务网

    马铃薯葡萄糖琼脂培养基是使用最频繁的培养基,简称PDA,主要用于真菌的分离和培养,有时也用于植物病原细菌的培养。

    PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基)配方:去皮马铃薯200g 葡萄糖20g琼脂15—20g蒸馏水1000ml 自然pH。在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,这样配制的培养基也称为PSA培养基。
  (1)称量。称量去皮马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15--20g。提示:琼脂加入的量取决于琼脂的质量,质量好的15g就够了,质量差的应适当增加。另外,在夏天气温较高时,适当增加用量。
  (2)将马铃薯切成小块,放入锅中,加水1000ml,煮沸20~30min。用纱布滤去马铃薯残渣。
  (3)将马铃薯滤液放回锅中,加入琼脂,加热熔化。
  提示:在琼脂熔化的过程中,需要用玻璃棒不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
  (4)加入葡萄糖。葡萄糖溶解后,加入适量的水以补充加热过程中损失的水分,定容至1000ml。
  提示:通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度,如1000ml、2000ml等,在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。
  (5)分装。根据不同的实验目的,可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管,其量为管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
  (6)加塞。在管口或瓶口塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花,棉塞可过滤空气,防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发,故在植物病理学研究工作中普遍使用。
  正确的棉塞是形状、大小、松紧与管口或瓶口完全适合,过紧时妨碍空气流通,操作不便;过松则达不到滤菌的目的,且棉塞过小往往容易掉进试管内。正确的棉塞头较大,约有1/3在外,2/3在试管内。分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞,引起污染。如不使用棉塞也可用橡皮塞或特制的金属、塑料试管帽,为让空气可以自由进出,橡皮塞不要过紧,灭菌前应夹一纱线在管口。
  (7)包扎。加塞后,将试管用线绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。
  (8)灭菌。将上述培养基以0.103MPa,121℃,高压蒸气灭菌20~30min。可以用家用高压锅上汽后灭菌1小时。
  (9)搁置斜面。将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
  培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,或常温下放置几天后无菌生长者方可使用。PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
  提示:pH不要调过头,以避免回调而影响培养墓内各离子的浓度。配制低pH的琼脂培养基时,若预先调好pH并在高压蒸汽下灭菌,则琼脂因水解不能凝固。因此,应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合,或在中性pH条件下灭菌,再调整pH。

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