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北虫草液体菌种制作方法

发布日期: 2014-01-14   来源:中国食用菌商务网

    一、培养基配方
    配方:玉米粉1%、葡萄糖2%、蛋白胨1%、酵母粉0.5%、磷酸二氢钾0.1%、水95.35%、硫酸镁0.05%、维生素B1 10mg、PH值调至6.5左右。
    二、制作培养方法
    1. 制作一级摇瓶种:将这些原料溶于水后装在500毫升三角瓶中,每个三角瓶装量200毫升,放入玻璃珠3粒左右,塞紧棉塞,然后用4层纱布罩住棉塞、瓶口扎紧,放在高压灭菌锅内进行消毒,待压力表上升至0.5kg/cm2压力时,即放净冷气待指针降至0后,再关掉放气阀门,待温度表指针逐渐上升至1.1kg/cm2后就开始保温30分钟后,慢慢下降指针至0,然后开盖冷却至常温,再移入接种箱或超净工作台等待接种。
    2. 接种方法:先把灭菌后的北虫草液体菌种培养基移放在超净工作台上,并把北虫草母种和接种勾、酒精灯、酒精棉球等接种物品也放在超净工作台上,工作服挂在接种室消毒。然后在接种室点燃烟雾剂(用臭氧消毒器更好),立即关闭所有门窗密闭消毒同时打开紫外线灯。待40min后,将烟雾放净,关闭紫外线灯,接种人员就可进行接种。接种的方法是穿好工作服,打开超净工作台风机,点燃酒精灯,左手拿着母种试管对准火焰口,右手拿着铁勾在酒精灯火焰消毒3-5秒种后立即伸进母种试管内把菌种分成5-7段,再用左手迅速将纱布瓶盖打开,右手立即把一段菌块勾入瓶内(每瓶接入5-6片0.5平方厘米大小菌种)速将瓶盖按原样盖紧。
    当北虫草菌种接好后,移入22-24℃恒温培养室,摇床震荡发菌培养。摇床转速140r/min,经过4-6天的发菌培养,经检查北虫草菌液的颜色开始清亮、菌球密集,瓶口闻有很浓的北虫草气味,可判断为菌种优良。如发现发菌瓶内浓度低、气味臭,并有五颜六色的菌液,就是有杂菌污染,坚决不能用。
    3. 制作二级摇瓶:培养基同一级,用5000ml三角瓶装量2000ml北虫草液体菌种,灭菌冷却后把一级摇瓶种按10%无菌操作接入大摇瓶,22-24℃,140r/min震荡培养72小时后,菌球大小均匀、密度80%以上,菌液清亮,气味清香、无污染的即为合格菌种。由于5000ml大摇瓶体积较大,用手提高压锅放不下,用大锅又太浪费,为解决大摇瓶灭菌问题,花山食用菌研究所研制了一款100升立式电加热自控高压灭菌锅,一次可灭4个5000的大摇瓶,同时,研制了一次可摇5-7瓶5000ml大三角瓶的摇床,轻便、无噪音、耗能低。
    4. 菌种稀释:发好的虫草液体菌种接种前需要稀释以扩大接种规模。稀释倍数依据接种的盘数按5-8倍稀释。用稀释罐稀释时,按液体罐空消、实消操作规程:
    (A)发酵罐空消
    发酵罐空消(内胆、过滤器、管线的消毒)是对发酵罐进行设备消毒灭菌的过程,对于放置一周不用的发酵罐或者是因为停电使空压机(打气泵)停止运转的发酵罐都需要进行发酵罐的空消操作,具体的操作方法:
    (1)关闭发酵罐,除夹套排气门外的所有阀门,拧紧发酵罐罐口盖子。
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