1、接种 待袋内温度降至30℃以下，即可趁热接种。银耳栽培种表层老化菌丝要挖去，然后往下挖3厘米成碗形的菌丝，并搅拌均匀，在过消毒的接种室或接种箱内，先打开袋子穴口胶布，用银耳接种器接入蚕豆大小的菌种，接种时秘须严格进行无菌操作，接种块要比胶布凹1－2毫米，以利于后期形成子实体原基，一般每瓶栽培种可接23－30栽培袋。
    2、培养发菌 接种后的菌袋应立即搬入培菌室内排放，培菌室内温度实4天保持28℃，不应超过30℃，否则易导致大量杂菌感染。第5天菌丝明显开始吃料，长满接种穴，此时温度控制在25℃左右，并进行一次翻堆检查，发现杂菌感染穴内的，用福尔马林注射其周围进行杀灭。为使增温发菌快，5－6天可将袋成井字形排放4－5层。穴口菌丝开始连接时应将袋均匀排放，袋与袋之间要留1厘米左右的空隙，发菌的前10天应控制室内空气相对湿度在70％以下，每天通风1－2次，每次20－30分钟。