1.分离用种菇的选择 在优良品种出菇选择单菇重量大、菌盖圆整、菌柄细短、菌肉厚实、颜色鲜、有鳞片且无病虫害的单菇，要求开伞度在7～8分正处在正常生长中的种菇。
    2.种菇的消毒处理 选好的种菇带入接种室内，剪去菇根，用消毒镊子夹住菌柄，并用75%的医用酒精擦拭消毒2～3遍，然后将分离用工具用常规法消毒后移入无菌分离区。
    3.分离种菇的组织块 在无菌条件下，用酒精擦手消毒后，用手纵向将种菇掰开，迅速用接种刀将掰开菇的菌盖和菌柄的交界处菌肉上横划两刀，并在划口中间每隔2毫米竖划一刀，及时用镊子夹取组织块，迅速接入试管斜面培养基中间部位，并用镊子稍压一下，以保证组织块与培养基充分接触。
    4.母种的培养接种后将试管放在温度23～25℃的培养箱中，经2～3天，可见组织块周围有灰白色放射状的菌丝，再过1～2天菌丝开始蔓延到试管斜面上。大约12～15天菌丝可长满整个试管，选择菌丝洁白粗壮、整齐一致平铺于斜面上的试管留作母种，其余淘汰。母种经低温复壮后就可以扩繁原种、栽培种及进行出菇试验。