菌种生产程序,通常分为母种、原种和栽培种3个层次,也就是通常所说的一级、二级、三级菌种。其中母种的分离选育技术性强,要求精化;而原种和栽培种的制作则相对比较简单。下面介绍各级菌种的制作技术。
一、母种的分离选育
母种主要采用人工选择、诱变育种、杂交育种和原生质融合等手段获得。作为一般制种专业户,可以采用人工选择方式分离培育母种,具体步骤与操作方法如下。
1.采集种源 从野生或人工栽培群体中,选择有代表性的优良菇体作为种源。①种菇选择时间。一般在11月上中旬,在第1批和第2批菇中挑选。因为这段时间蘑菇生长正是旺盛时期,菌丝生活力强,子实体健壮,质量好,加之气温适宜,蘑菇能正常成熟。②种菇的标准是:八成熟,朵形圆正,肉质肥厚,颜色洁白,无病虫害。采集一二朵符合上述标准的种菇编上号码,作为分离母种的材料。从栽培室采集的应标有原菌株代号。
2.培养基配制 琼脂培养基又叫PDA培养基,常用配方为:马铃薯200克、琼脂16克~18克、葡萄糖20克、水1000毫升。先将马铃薯洗净去皮,切成薄片,置于铝锅内加水煮沸15分钟~30分钟至薯块酥而不烂为止。煮后用6层~8层事先浸湿拧干的纱布过滤,过滤后加入琼脂16克~18克(气温低时加 16克,气温高时加18克)再煮,并不断搅拌,使固体琼脂完全溶化,再用4层~6层纱布过滤。将滤液加水至1000毫升加入20克葡萄糖,搅拌溶化趁热分装试管。装入量为试管高度的1/4~1/5,注意培养基不要粘着试管口,管口用棉塞塞紧,或将汁液装入玻璃三角瓶内,每瓶装量为20毫升。然后置于高压锅内,在压力达108千帕,锅内温度为121℃灭菌30分钟左右。灭菌后及时取出,趁热将试管斜排于桌上,冷却后即成为固体斜面培养基。