将料瓶进行常规的高压蒸汽灭菌或常压蒸汽灭菌。待料温降到25℃以下进行接种，接种过程均按无菌操作进行。接种量以塞满接种孔为宜。接种后立即移至培养室，温度20℃为宜。因为瓶内菌丝生长呼吸发热，瓶内温度一般比室温高2～4℃，气温低时，室内门窗应关闭，每隔5～6小时通风换气一次，发菌期间还应定期调换瓶的位置，使之发菌均匀。一般经过22～25天菌丝能长满全瓶。