高压蒸汽灭菌和常压蒸汽灭菌统称湿热灭菌。其原理是通过饱和蒸汽杀死物体上和介质中的全部病原微生物及其孢子和芽孢。湿热灭菌的饱和蒸汽具有很强的穿透力，可以破坏病原微生物及其孢子和芽孢的核酸、使蛋白质变性凝固、酶失去活性。
    高压蒸汽灭菌器是一个可密闭的容器，由于蒸汽不能逸出，水的沸点随着压力的增加而提高，因而加强了蒸汽的穿透力，可以在较短的时间内达到灭菌的效果。理论上讲木屑、棉壳等固体培养基的灭菌须128℃（1.5～1.6公斤/平方厘米）下维持1.5～1.8小时。而常压蒸汽灭菌由于灭菌设备不密封，灭菌效果不如高压灭菌迅速，所需时间也要多得多。一般常压蒸汽灭菌先用大火使水温升至沸点，维持10～12小时，至结束时再用旺火烧1小时，然后慢慢冷却，才能提高灭菌效果。
    从原来习惯使用常压蒸汽灭菌改为高压蒸汽灭菌的栽培户应注意以下几方面：
    1、塑料袋的选择不同
    常压蒸汽灭菌一般选用聚乙烯薄膜，而高压蒸汽灭菌应选用聚丙烯薄膜，厚度为5～6丝，过薄，耐压和耐热能力低，会影响成品率。聚乙烯薄膜不耐高压，在1.2公斤/平方厘米高压下会融化，不能使用。
    2、消毒压力和温度不能过高
    高压蒸汽消毒压力比较高，但由于培养基包装大多使用塑料薄膜，消毒压力不能超过1.4公斤/平方厘米，可以通过延长消毒时间至2小时左右来达到消毒效果。消毒压力和温度过高，薄膜会出现融化或膨胀，产生裂缝、小洞，接种后易感染杂菌。
    3、消毒时间应随培养基质不同而不同
    一般而言，颗粒大的消毒时间长，麦粒、玉米作为基质时的消毒时应该长于木屑。
    4、加压过程中应先放尽锅内冷气
    由于高压锅加热初始锅内存有冷空气，开始加热后，热蒸汽集聚在锅的上部，越聚越多，压力越来越高，冷空气却还集聚底部，这时压力表上显示的压力是虚假的，只有把底部的冷空气放掉，显示的才是真实的压力。方法是加热后，当压力表压力达到0.5公斤/平方厘米时，打开放气阀，放尽空气，再加热灭菌。如能放二次空气，效果会更好。
    5、加热升温和放气减压要慢
    塑料袋的薄膜是软性的，高压锅加热和减压过程中塑料袋内外存有压力差，加热或减压过快，内外压力差异就大，容易引起塑料袋变形或胀袋、裂缝，接种后易感染杂菌。
    另外，在菌种袋外套一牛皮纸袋（可以反复利用），可以减少因装袋、搬运、接种过程中硬物碰撞造成的塑料袋破损。由于各个厂生产的灭菌锅，其质量、结构、容量不同，塑料袋的均匀度、培养料的颗粒、质地不一样，加上工作人员操作技术不同，在大面积应用时应反复比较试验，选出一个最佳方案后再应用。