做液体菌种的几大重要环节：

    1.菌种制作

    液体母种的制作也有较多方法，我一般就是用小木屑加其他营养料，用锥形瓶培养。此环节比固体菌种培养要更仔细一些，特别注意细菌的监测，菌种环节一定要把握好。

    2.培养液的灭菌环节

    此环节要严格按照操作规程，把握好每一步，确保培养液灭菌彻底。期间注意的是，培养液不能加太满，否则放气的时候，液体从放气阀冲出。个人建议在放气阀上再安装一个逆止阀，避免停电。

    3.接种环节

    接种环节也是很重要的环节，我们一般是将母种先钩出来放到另一个装有蒸馏水的大锥形瓶中，然后再倒入培养罐。哥哥环节必须有大火保护，否则容易感染。

    4.培养环节、监测菌种纯度（最重要环节）

    个人认为此环节是液体菌种培养的中心环节，也是最重要的环节。培养菌种严格按照操作规程，注意每个细节。

   （1）空气过滤器和接入培养罐的硅胶管要一起提前灭菌，建议在空气过滤器和接入培养罐的硅胶管间安装一个逆止阀，防止培养液倒流，这是很关键的，否则培养时因为内外压力差变化，培养液容易回流。

   （2）监测菌种纯度。这一步是至关重要的环节，此步骤将直接决定你的成败，监测不好可能会导致全军覆没。监测菌种纯度有以下几种方法：

    a.看：看培养液是否透明澄清，菌球是否均匀。培养液不能浑浊。用试管或锥形瓶，从下面接出少量液体（注意，一定要在大火焰的保护下进行），观察菌球是否悬浮，不能在短时间内下沉或上浮。

    b.闻：闻放气阀处是否有菌丝的纯香，不能是其他酒精味、酸味甚至恶臭，要回辨别霉菌和细菌感染时不同的气味。

    c.显微镜观察：显微镜观察一些霉菌的特征，平时可以将已经确定的液体菌拿来观察练习，借助一些教材，对比观察，这是经验累积才能确定的，但也是必不可少的。显微镜具体使用方法本论坛有介绍。

    d.培养监测：这一步是最简单也是最直观的，直接反应了该菌种是否纯净。具体操作如下：提前做好试管或锥形瓶琼脂培养基，并提前做好灭菌工作，再用此小锥形瓶或试管，在培养罐的下面放料处，接少量的培养液（这一步两人操作，一个人负责火焰保护，一个人负责接液体），整个过程在火焰的保护下塞上棉塞。倾斜放置，让部分琼脂露出培养液。控制温度，1-2天即可观察，霉菌和细菌都可以尽收眼底，如果有感染，培养罐全体培养液应及时放弃，否则后果很严重。

    5.接种环节

    首先确保液体菌种纯净且旺盛的前提下，再讨论接种环节。接种也是液体菌种生产较为关键的环节，因为菌种含水量大，操作中很容易感染空气中的杂菌。我把我的接种方法透露一下，希望对您有帮助。接种操作：五人一组，每一组一把接种枪，五个酒精灯。一个人专门负责接种枪的把握注射菌种，其余四人负责打开袋口（菌袋最好用无棉盖封口，便于操作）。每人面前一个酒精灯，酒精灯火焰一定要大，大到可以包围无棉盖口。接种时，在火焰上打开盖口，在火焰上接种，接完后，在火焰上盖上盖口，整个环节要迅速，否则火焰要把菌袋烧坏。接种枪在没有用的时候将整个枪头放在火焰上，避免在空气中放置。 整个操作环节保险度极高，对接种室的灭菌要求不高。