(一) 材料及用具

  蜂窝煤炉一个，工作台(与炉同高)，坐椅，空周转箱，支架，接种针、铲、镊子，专用接种器，刀片，绳子，护筒(用铁皮做成长20cm直径与原种瓶外径相当)，0.1%升汞棉球，75%酒精棉球。

(二) 操作要点

 在无菌接种室煤炉生火后，微启风门，这样就形成了一个干热气流即干热无菌区域。

 ①母种分离 将巳灭菌的琼脂斜面试管、谷类试管等，将其4~5支用绳子绑成一组，放支架上试管口正对干热区。用右手食拇指拨下管口棉塞(不能弃掉)，在无菌区内用酒精棉球将试管棉塞外表消毒，然后左手将消过毒的刀递给右手的大拇指与食指拿好，左手将要分离的巳经用升汞消过毒的食用菌子实体，放入右手的三指和四指间夹住，左手进行子实体再次消毒，再放回左手;用刀片切开子实体，取柄部中心0.5cm见方的组织，再用无菌接种针挑起，经过干热无菌区伸入试管培养基面上，再塞好棉塞即可。就依照同样方法依次接完一组，再进行第二组、第三组分离接种。

 ②转接母种和原种制备 将已用升汞棉球外壁灭菌的试管母种，放支架上管口伸入干热无菌区，拔去棉塞。再用无菌接种铲取试管内母种一小块，经过干热无菌区，伸进另一支已灭过菌的母种培养基面上，达到转管转接母种的目的。母种转接原种的方法是一致的，不必重复说明。

 ③栽培种制备 用支架将护筒固定在干热无菌区上方横卧，将要被接种的已灭菌的栽培种瓶伸入护筒内，瓶口伸入干热区内，再用无菌专用接种器取原种瓶内原种，经过干热无菌区伸入被接栽培种培养基瓶挤出，然后盖上棉塞，这样—瓶栽培种就转接好了。依照此法完成所有栽培种转接工作。

 (三) 注意事项

 ①母种、原种、栽培种、被分离子实体都分别要消毒灭菌处理;

 ②接种室、工具、辅助材料都要统—消毒灭菌;

 ③整个操作始终不得离开炉火干热区接种;

 ④炉子风门微启，如果太热了可以短暂关闭;

 ⑤各级种剩装容器必须为玻璃器件;

 ⑥接种室要设无菌缓冲间和空气对流无菌缓冲窗。