一、培养基灭菌计时结束，压力表指针回零后，可将高压锅锅盖打开，但不拿走，在锅上移开一道缝隙，让锅内的热气涌出，让棉塞和试管内的水蒸气先蒸发一部分。约10分钟后，再将母种培养基取出，这对预防冷凝水的形成有很大的作用；

二、母种培养基灭菌完毕，取出摆放斜面后，可用多层厚厚的干净纱布等将刚摆好的试管培养基盖好，一是可以防止在冷却过程中有灰尘降落在试管培养基表面，影响以后的无菌操作；二是可以防止在冷却过程中，玻璃试管内外温差过大，尽量降低冷凝水的形成。实际上，这一方法还不能完全杜绝冷凝水的形成；

三、如用硅胶塞封试管口，可提前一周将母种培养基做好。如果用棉塞封口，时间可适当缩短，这样经过一周左右的静置，母种培养基管壁和斜面上的冷凝水可基本蒸发掉，在使用时就会非常方便。这一点可能有很多人反对，因为很多教科书上说，母种培养基要现做现用，或尽快使用，否则容易被杂菌污染，其实没有那么严重，只要母种培养基灭菌彻底，放置时间再长也没有什么问题，这一点大可放心。不过在放置时要注意环境卫生，培养基试管口要稍微抬起放置，不能放在灰尘很多的地方，试管口可以用牛皮纸包好，特别是棉塞封口的培养基不能密封保存，防止棉塞滋生杂菌，这一点很重要。

四、如果实在要急用培养基，带冷凝水接种也可以，有可能在菌丝生长时会受到冷凝水的影响，生长暂时可能表现不良，不过没有问题，随着水份的蒸发和菌丝的快速生长，慢慢就会表现正常。这里提几个细节，如果带水接种，在母种培养阶段，母种培养基的口部要稍微抬起，防止冷凝水流到管口，打湿棉塞或硅胶塞，这个会对菌种的质量产生不良影响；如果冷凝水太多，可在接种时倒掉，这时要注意无菌操作，不能让冷凝水回流，倒完后，继续保持倾斜姿势，在酒精灯火焰附近将管口灼烧后，才能开始接种操作，严防管口带菌，随水回流进入管内，造成不必要的污染；也可将管口先灼烧灭菌后，再将水倒掉。