羊肚菌母种培养基最好采用黄豆芽、玉米粉、麦麸、蔗糖、苹果汁等多种营养成分配成的综合培养基,不能单单使用PDA培养基,避免营养成分单一化。从许多单位试验明显表示,常见的PDA培养基的母种菌丝增长速度,比起综合培养基慢2倍,而且菌丝长势细弱,菌丝干重量也相差1.2倍。
准备的材料:豆芽200克(煮汁),葡萄糖20克,琼脂20克,硫酸镁0.3克,磷酸二氢钾1.5克,维生素B8克,水1000毫升
培养基制备:
1. 将黄豆芽200克洗净放水中烧煮,将营养成分都煮出来。
2. 在玻璃或金属容器内加1200ml水,煮沸20min,用4层纱布进行过滤并洗涤,挤压固体物后得到滤液1000ml。
3. 将葡萄糖或蔗糖、琼脂、硫酸镁、磷酸二氢钾,维生素B等加入溶解,都溶化后,分装到试管中。
4. 分装的高度可以是试管总长度的1/7~1/6、1/5~14、1/3,试管口先用棉塞塞上,粘到管口的培养基须擦干净,然后盖紧硅胶塞。
5. 灭菌锅为手提式高压灭菌锅的,装锅时要10支扎成一把,竖立排放整齐。盖锅盖时,要对角拧紧螺丝。当压力达到0.05MPa时,打开排气阀缓慢排净冷气;当压力达到0.12MPa时,123~125℃保持30min。灭菌期间须人不离锅,发现异常立即停火检查并消除隐患。
6. 冷却:灭菌结束后自然冷却,压力归零即可打开锅盖。开始摆放试管斜面时,须保证液面顶端距硅胶塞内端大于2cm,防止液体粘到硅胶塞上。在摆好的试管上覆盖毛巾,防止出现冷凝水。
注意:不要使用刚刚灭菌后摆成的斜面试管培养基,因为培养基表面有大量的冷凝水水珠,接种物如孢子、组织块、菌丝块很容易被淹没,菌丝容易死亡,特别是一旦接种物有细菌污染会导致全试管的污染,造成操作失败。