用高压蒸汽灭菌。先在锅内加水(约300毫升)至规定水位，再放入消毒桶，固定锅盖，勿使漏气。然后将灭菌锅放在煤气炉或电炉上，关上排气阀加热，当压力表指针达到4.9x10*帕(0.5 千克力/平方厘米)时，打开放气阀，排出锅内冷气，待压力降至“0”，再关上排气阀。如果重复一次，灭菌效果更好。此后温度表及压力表的指针逐渐上升，当灭菌锅内压力达到9.8x10帕(1千克力/平方厘米)时，调节火源，使压力维持在9.8x10帕，持续30~40分钟。然后关闭热源，等压力自然下降至0，打开排气阀，排出水蒸气，利用余热烘烤报纸和棉塞，待半小时后取出。在干净的房间内摆成斜面，斜面长度一般是试管长度的1/2左右，不得超过3/5处。摆放斜面以成捆斜放较好，斜面表面的冷凝水较少。如果室温太低，斜面上易出现冷凝水，对接种和菌种生长都不利。可在斜面上盖几层干净纱布保温，使其慢慢凝固，冷凝水就会大量减少。母种培养基做好后，如生产上一时用不完，可放入冰箱冷藏室保存20天左右。