1．培养基配方。①木粒或木屑78%，麦麸20%，白糖、石膏各1%，适用于木腐菌类和需要储存的分离菌种；②高粱78%，麦麸20%，白糖、石膏各1%；③木屑或锯末60%，棉籽壳20%，麦麸18%，白糖、石膏各1%。

   2．拌料装瓶。合成培养基含水率在50%～55%，装入洗净的医用500毫升或250毫升的玻璃瓶至瓶肩或半瓶，在基料中心扎一个到底的透气孔，盛入少量清水，涮去瓶口内壁残留培养基后，倒出多余水分，洗涮时使培养料上层1厘米深度含水量大于55%。盖上原来的胶盖（胶盖中心提前打直径 5毫米的孔，并塞入透气棉塞），高压或常压灭菌。

   3．子实体分离培养。选优质未开伞的子实体，在无菌箱中用75%的酒精冲洗一遍（切勿津洗），把剃须刀片过火消毒后，削去酒精津蚀的菇蕾表面，分割成黄豆粒大小的碎块，放在无菌器皿上。接种瓶口在酒精灯上烧一圈，将接种针灼烧消毒，稍凉后在酒精灯下粘（或扎牢）分离的接种块，并迅速放入培养基瓶中，瓶盖在酒精灯上烤一遍盖严，在室温24～26℃下按常规方法养菌。需要长期保存的母种，在菌丝长过培养料四分之一时，用石蜡封住瓶盖中心的棉塞孔，避光、常温下可存放两年以上。

   4．出菇试验。菌丝长到瓶底后，按分离菌种品种的出菇特性催菇。催菇时不要打开瓶盖，每天给予一次光亮和下行温差刺激，连续进行5～6天，再按子实体需要的温度培养，直到长出菇蕾或子实体成熟。其中，晚熟型香菇品种，适宜在瓶内菌种的上沿出现黄褐色斑时进行出菇试验。

  在封闭的无菌条件下做过出菇试验的菌种，仍然可以按照菌丝体分离法扩制第一代母种或零代原种。出菇后的菌种，宜在子实体长成菇蕾之前扩种。