1. 培养基配方
小麦70%~75%,稻壳3%~5%,阔叶树木屑或玉米芯18%~23%,碳酸钙1%,石膏1%,含水量60%~62%,pH自然。
2. 原料预处理
小麦用清水浸泡24~48 h或煮沸20 min,捞起、沥干,干/湿为1/1.8~2.0;稻壳浸泡24 h,捞起、沥干;木屑、玉米芯加水拌匀,堆制发酵2周后使用。堆制方法:玉米芯、木屑、稻壳混合,加1.2倍水搅拌均匀,建1~1.2 m高的堆,盖厚膜发酵,第6~7天翻堆1次,发酵5天后再次翻堆,4天后摊开晾晒1~2天即可使用。
3. 拌料、装瓶、灭菌
将各种辅料与小麦按比例混合均匀,水分含量以用手挤压有水迹而不下滴为度。装料采用新的体积为750~2000 mL的带通气盖聚丙烯菌种瓶,不能使用旧的菌种瓶、玻璃瓶和通气盖。将培养料装入菌种瓶中,用清水清洗瓶口、底部和外表面,透气盖封口。采用高压灭菌锅灭菌,121~125°C下保持2~3 h,自然冷却。
4. 接种、培养
接种方法:在超净工作台上,用75%乙醇喷洒工作台,放入待接菌种瓶,点燃酒精灯,在无菌条件下接入一级斜面菌种,斜面长度5~10 mm,每支试管斜面菌种接5~6瓶原种。
接种后置于20~23°C培养箱中避光培养15~25天,菌丝满瓶后立即使用。
5. 注意事项
小麦的处理,浸泡和蒸煮择一即可,不同时进行,因为小麦的干/湿比达到1/3时,其含水量会超过70%,灭菌后易发生表皮破裂而黏连,菌丝无法长满全部培养料。宜选用厚皮的小麦,如常见的红皮小麦;而薄皮的小麦表皮容易在蒸煮、灭菌过程中破裂,影响菌种质量。经验丰富的技术人员一般会采用纯麦粒生产原种。不宜使用长期存放的木屑、玉米芯等原料。长满的原种须尽快使用。