一、菌种制备

  优质菌种是种植成功和高效的关键，蛹虫草菌种不可长期保存或多次转管扩繁，否则菌种容易退化变异，产量和品质会明显下降。因此需要经常留种和更新菌种。

  制种方法是采取组织分离法。选择适应性强、发菌快、见光转色快、性状稳定、速生高产的菌株进行组织分离制种，也可直接购买斜面培养基试管母种自行进行扩繁。目前有固体菌种和液体菌种2种类型，其中以液体菌种接种为好。

(一)液体配制

  液体配比为葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾3 g、硫酸镁1 g、维生素B1 1片(10 mg)、水1 000 mL(pH值6～7)。先将1 000 mL水加热增温(约40 ℃)，倒入蛋白胨搅拌溶解，再倒入其余原料充分搅拌;然后用pH试纸测试酸碱度(标准pH值是6～7)，若偏酸则用氢氧化钠调和，偏碱则用白醋或盐酸调节。

  营养液配制的多少应根据生产量灵活掌握。实践证明使用吸液管喷洒接种，每个培养瓶喷洒菌种4～5 mL，每瓶液体菌种(指小型医用盐水瓶)可接种37～40瓶;也可用蒸馏水或高压灭菌水将液体菌种稀释2～3倍进行接种，可大大提高菌种使用率。

(二) 装瓶

  选用500 mL的医用盐水瓶或250 mL小型医用盐水瓶作为液体菌种培养瓶(500 mL大瓶可分装300 mL培养液，250 mL小瓶装至1/2/以上)。装瓶时用玻璃漏斗以免培养液粘附于瓶口、瓶颈或瓶壁上而招致杂菌感染。瓶口用聚丙烯薄膜或化学棉、脱脂棉棉球封塞严密。

(三) 高压灭菌

  用手提式高压灭菌锅灭菌。将上述培养瓶整齐地摆放锅内，上面用干毛巾盖好瓶口关紧锅盖。大火加热至110 ℃，压力表指针指向0.05时打开排气阀以便排出冷空气，待压力表回至0时关掉排气阀;然后大火加热让其快速升温至125～126 ℃，压力表指针指向0.15时改用小火，维持1.25 h后停火，等压力表回到0位，冷却后打开锅盖取瓶出锅。

(四)放种

  培养瓶完全冷却后方可下种，母种扩繁在接种箱进行无菌操作。先将接种用一切用品、工具和试管母种及培养瓶事先放入接种箱内进行消毒。操作人员从接种口把手伸入箱内，在消毒碗内点燃至少2袋起舞消毒剂，进行薰蒸消毒。随即用袖头把接种口堵塞严密，密闭30 min。

  操作人员将手洗净，并用75%酒精擦洗1遍，通过袖头伸入接种箱。再用75%酒精把手连同手腕部位一并擦洗1遍，用皮筋把袖头在手腕部扎紧，严防杂菌进入箱内。点着酒精灯把接种工具用75%酒精擦洗1遍再放在酒精灯上方燎烤消毒;拿起母种试管，用75%酒精擦洗管口周围，并在酒精灯火焰上方燎烤一下。打开母种试管，用接种工具将试管母种切割成0.5 mm×0.5 mm大小菌块，在靠近酒精灯的无菌区进行放种，每瓶放种2～3块。

(五)液体菌种培养

  为利于菌种繁殖和菌丝生长应将放完种的培养瓶放置黑暗环境中，在摇床上进行振荡培养，可全天24 h不停振荡培养或间歇式每隔1 h左右振摇1次，每次30 min左右。经过8～12 d振荡培养瓶中便有大量絮状、片状菌丝体和菌丝球充满整个培养瓶;若无摇床条件可用手摇措施振动瓶液，每隔1～2 h摇动1次为好。注意不可将营养液打湿封膜或棉塞。

二、培养基原料配制

(一)原料配方

  实践表明人工代料栽培还是选用大米(杂交米)作主料为最好，具有发菌均匀、出草快、产量高的特点。每瓶装大米30 g、黄豆粉(豆面)3 g、营养液50 mL;营养液配方为水1 000 mL(pH值6～7)、葡萄糖25 g、蛋白胨10 g、磷酸二氢钾1.5 g、硫酸镁1 g、柠檬酸铵1 g、维生素B1 2片。

(二)实例

  为提高拌料和装瓶的效率，可一次性拌好能装1 000～2 000瓶的原料，同时应精确地计算出主料和各种辅料的用量。

  现以每批装1 000瓶为例，配料如下。主料：大米30 g×1 000=30 kg，黄豆粉3 g×1 000=3 kg;辅料：水50 g×1 000=50 kg，葡萄糖1 250 g，蛋白胨500 g，磷酸二氢钾150 g，硫酸镁50 g，柠檬酸铵50 g，维生素B1 100片。

三、拌料

  在地坪上铺1块干净塑料布将上述2种主料称好倒在塑料布上充分掺拌均匀。再将几种辅料分别精准秤好倒入50 kg的水中充分搅拌使其溶化。用pH试纸测试酸碱度以pH值6～7为准。

四、装瓶

  可分别自制几个能定量盛装33 g主料(大米30 g，黄豆粉3 g)的容器和定量盛装50 mL液体的容器进行装瓶。装瓶时应先装主料再装营养液，装好后用皮筋封好膜后，摇动瓶里原料，使固体与液体充分混合均匀以利于发菌好、生长整齐。

五、灭菌

  可用高压蒸汽炉进行灭菌，即在121 ℃高温和1.5 kg/m2的压力下密闭灭菌30 min冷却后取出即可;也可常压灭菌，当温度升至100 ℃时再改小火维持8～10 h即可，焖锅一夜次日早出锅接种。

六、接种

  于接种箱中进行无菌操作点燃酒精灯，在靠近酒精灯的安全区打开液体菌种瓶，用吸液管吸取液体菌种，每瓶以4～5 mL种量均匀喷注到培养基上，立即封口扎紧(下种量要均匀，喷注菌种尽量匀称);接好一批培养瓶后及时转入培养室(黑暗环境)进行菌丝培养;接种操作每批之间必须重新消毒，点燃起舞消毒剂2～3袋(第1箱消毒时3袋，之后2袋)。密闭30 min即达消毒效果;将接种好培养瓶整齐摆放在培养架上。

七、菌丝培养

    蛹虫草属中低温真菌类，菌丝最适宜生长温度是15～25 ℃，子座最适宜温度为18～22 ℃。要求培养室内具备调节温度、湿度和光照的基本条件;培养室放置培养架，培养架可设6～7层，层高40 cm，保证每个培养瓶都能得到光照。一般25～30 m2的房间可摆放10 000个培养瓶，可生产80 kg左右干品。

(一) 初始阶段(前5 d)

  菌丝萌发阶段要求做到“三控”：一是控光，需要黑暗环境;二是控温，培养室内温度最好控制在15～18 ℃;三是控湿，室内空气相对湿度控制在60%左右。

  接种第2天培养瓶料面上可见到点片或连片发菌;第3天菌丝已大面积展开，占领料面50%以上;第4天菌丝占领料面80%以上;第5天菌丝全部发满料面，并已开始向培养基内渗透一指左右。稀释与未稀释菌种，其菌丝萌发能力完全相同，采取稀释2～3倍方法可解决菌种不足问题。经过5 d时间培养培养瓶里菌丝很快布满整个料面。

(二)待菌丝布满料面后(5 d后)

  可将温度提高至20～23 ℃再继续培养15 d左右，菌丝就可吃透整瓶培养基，至此菌丝就完成营养生长阶段，标志菌丝体已发育成熟，开始进入生殖生长时期。

(三)进入生殖生长阶段后(接种后20 d左右)

  进行光照刺激，促进菌丝体转色。打开日光灯，进行全天24 h光照，直到蛹虫草发芽长出小子实体时，再改为白天光照14～15 h，夜晚关灯。白天温度控制在20 ℃，晚上控制在10 ℃左右，通过温差刺激能促进菌丝快速发育;室内湿度60%～65%。见光第1天，料面上菌丝出现微黄;第2天显现正黄色;第3天培养基内菌丝全变鲜黄或米黄色;第4天整瓶呈橘黄色;第5～7天，菌丝基本转完色;第7～10天，料面上出现米粒大小原基。

八、出草管理

  经菌丝体生长发育，待培养基料面有突起形成米粒状原基时，蛹虫草即行发芽出草。

(一) 扎孔透气

  将牙签或铁丝经75%酒精擦洗消毒后，在封口膜上扎6～8个通气孔，加强气体交换促使子实体的生长。

(二) 加强室内通风换气

  打开换气扇或用电风扇吹风，每天早、中、晚各通风1次，以便补充新鲜空气和排出CO2，防止CO2积累过多，子座不能正常分化影响生长发育。

(三)温湿度管理

  到了出草阶段温度和湿度对子实体的生长十分重要。温度控制在18～21 ℃。尽量使空气相对湿度提高到80%～85%。室内湿度过小时瓶内培养基容易提早失水而影响产量;若室内湿度过大时容易诱发气生菌丝，对子实体生长同样不利。可采取在地面上洒水或泼水，空间用空气加湿器增加室内湿度;无条件用空气加湿器者，可用喷雾器在空间喷雾增湿。

(四)光照管理

  生长一段时间部分瓶里的子实体有一边倒现象，这是由于蛹虫草较强的趋光性所致。因此应注意在子实体形成后可根据生长情况调整培养瓶与光源相对方向，让其受光均匀，以提高产品的品质和产量。

九、采收

  经过45～50 d的精心培育子实体长至7～8 cm，子实体呈橘红色或橘黄色棒状，顶端出现许多小刺时，表明子实体已经成熟，这时就可采收;打开培养瓶封口膜，用消毒的摄子小心夹出子实体，注意不要碰伤子实体表皮，也不要用力太大以免拉断，影响商品价值;将采收的子实体放在干净的器具内，低温烘干或在空调或电风扇下吹干，不可在太阳下晒干，以免褪色影响商品价值。晾干标准：用手一捏即碎，然后再放空气中让其回潮，再用手一捏又不碎即可，干燥好的子实体装袋密封待售。