绣球菌菌种制作跟其他食用菌一样，包括母种、原种、栽培种三级。
1. 母种制备
母种是指经规范方法选育后而获得的、具有结性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，通常又称为一级种或者试管种。
关于绣球菌原始母种的来源，在有条件的地方可以从子实体上自行提取，但是由于制作过程要求严谨难度较高，所以一般的生产单位都是从国家认可研究单位购买而来的。买回后直接进行母种的扩繁就可以，首先先来看一下母种培养基的制作。
2. 母种培养基制作
制作母种培养基时所采用的配方为：复合糖蛋白30克，蛋白1克，大豆粉1克，KH2PO4(磷酸二氢钾)1克，琼脂粉20克，水1000毫升。
上面的料都准备好以后就可以制作了，将准备好的培养基配方依次倒入锅内，琼脂粉先不要放入，边加热边搅拌，等沸腾后再加入琼脂粉，并不断搅拌，直到琼脂粉完全融化，然后再将煮好的培养基倒入塑料杯内，这时需要注意的是，如果体积不足1000毫升还要加水。
3. 试管分装
整理好以后，要趁热将培养基倒入固定在铁架台上的漏斗内，用量筒量取10毫升的蒸馏水，倒入一支空试管内，做分装试管的对照。将漏斗软管下的玻璃管插入试管口约3厘米深处，用右手捏紧橡胶软管的止水夹，使培养基缓缓流入空试管内，直到液面与蒸馏水的液面持平为止，然后，松开止水夹让培养基停止流入，并将试管下移离开软管。
接下来，依次重复，直到将培养基全部分装到试管内，分装试管时需要注意的是，动作要迅速连贯，以防止培养基在漏斗内凝固。分装完成后，每支试管都要用硅胶塞住，接下来还要将试管进行扎捆。
4. 试管包扎
一般情况下，每7支试管作为一扎，先用橡皮筋将试管下端扎紧，再用牛皮纸将试管口处进行包裹，并用橡皮筋进行困扎。下面就要进行灭菌的工作了。
5. 培养基灭菌
将包扎好的培养基试管垂直放入灭菌框内，再将菌框放入灭菌锅内，在120摄氏度的高温下进行灭菌30分钟。待灭菌锅温度降至60摄氏度左右时，要及时取出试管，并将它们摆放成斜面。
6. 摆放斜面
斜面的长度以试管长度的1/2-2/3为好，当试管内培养基完全凝固后才可以将试管收起，制作好的母种培养基应放置在阴凉、通风、干燥处保存，留作备用。上面的工作都完成以后，还要进行母种的接种工作。
7. 转管过程
母种接种是将菌种接入试管斜面的过程。在完全无菌的接种箱、接种室或超净工作台上进行。
首先，将制备好的母种培养基，待转母种，酒精灯，打火机，接种钩，酒精棉球等放到超净工作台上，打开紫外灯在低速通风的环境下灭菌30分钟，然后关闭紫外灯，并将风速调节为中速，通风5分钟后再打开日光灯接种时，先点燃酒精灯，用酒精棉球将双手进行擦拭消毒，消毒完成后，用左手握住母种和斜面培养基试管各一支，注意，斜面要向上，同时还要使它们处水平的位置。
右手拿住接种钩，在火焰外焰上反复灼烧，直到接种钩最前端变为红色为止。接下来，拔掉两个试管的胶塞，将灼烧过的接种钩伸入母种试管内，将母种表层菌丝连同培养基挖取少许，送入待接试管内斜面的中间部位，抽出接种钩后，要灼烧管口，后再塞上胶塞。当所有的试管全部转接完成后，就可以进行培养了。
首先，要将试管重新捆扎，并记录好接种时间，将接种后的试管放入25摄氏度的恒温培养箱中，培养15天左右菌丝即可长满。
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